研究級(jí)的分光光度計(jì)一般由光源、激發(fā)光源、發(fā)射光源、試樣池、檢測(cè)器、顯示裝置等部件組成。激發(fā)光源是一個(gè)為樣品提供照射光的光源,一般使用氙燈。
研究級(jí)的分光光度計(jì)工作時(shí),由激發(fā)光源發(fā)出的白光進(jìn)入激發(fā)側(cè)單色器,測(cè)定激發(fā)光譜(吸收光譜)時(shí),改變激發(fā)光的波長(zhǎng),測(cè)定熒光強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的變化,測(cè)定熒光光譜時(shí),激發(fā)波長(zhǎng)固定,測(cè)量熒光強(qiáng)度隨發(fā)射波長(zhǎng)的變化。
來自激發(fā)側(cè)單色器的光照向樣品,沿著這個(gè)路徑,半透半反鏡會(huì)將光束分離,一部分光到達(dá)監(jiān)控檢測(cè)器,監(jiān)控檢測(cè)器用來監(jiān)控激發(fā)光到達(dá)樣品的強(qiáng)度,熒光分光光度計(jì)檢測(cè)器通常使用光電管、光電二級(jí)管、光電倍增管等。當(dāng)激發(fā)光到達(dá)樣品時(shí),樣品被激發(fā)以發(fā)出熒光,發(fā)出的熒光進(jìn)入熒光側(cè)單色器。
熒光分光光度計(jì)的靈敏度是一個(gè)重要的指標(biāo)。靈敏度表明如何獲得噪聲小且數(shù)據(jù)平滑的指標(biāo),該指標(biāo)越大,系統(tǒng)越好。它也被稱為信噪比。但是靈敏度的測(cè)量條件不同,這個(gè)指標(biāo)的數(shù)字也不同。若測(cè)量條件不一致,如狹縫、響應(yīng)(時(shí)間常量)等,則無法進(jìn)行不同系統(tǒng)的比較。
讀數(shù)不穩(wěn)定的原因:
1、先不放比色皿,看儀器是否漂移。如果不漂移,說明儀器正常。
2、放入蒸餾水比色皿調(diào)零,讀數(shù)漂移到一定數(shù)值后,取出比色皿看一下,內(nèi)壁是否有細(xì)小的氣泡。
我認(rèn)為影響紫外分光光度計(jì)讀數(shù)不穩(wěn)定的根本原因應(yīng)該有兩類:一類是能量降低,信噪比下降,這個(gè)可能性比較大;另一類是信號(hào)接收和處理故障。